Suggerimenti Per La Risoluzione Dei Problemi Per Prodotti PCR Non Specifici

Ecco alcuni semplici passaggi che possono aiutarti a risolvere i problemi di prodotti PCR non specifici.

Velocizza il tuo PC in pochi minuti

  • Passaggio 1: scarica e installa Restoro
  • Passaggio 2: avvia il programma e seleziona la scansione che desideri eseguire
  • Fase 3: esamina i risultati e agisci se necessario
  • Velocizza il tuo PC ora con questo download facile e gratuito.

    Test PCR basso, senza dubbio senza via d’uscita

    Velocizza il tuo PC in pochi minuti

    Ti presentiamo Restoro: la tua soluzione numero uno per correggere gli errori di Windows e ottimizzare le prestazioni del tuo PC. Questo software è essenziale per chiunque desideri mantenere il proprio computer in funzione senza intoppi, senza il fastidio di arresti anomali del sistema e altri problemi comuni. Con Restoro, puoi facilmente identificare e riparare eventuali errori di Windows, prevenendo la perdita di file, guasti hardware e tutti i tipi di brutte infezioni da malware. Inoltre, il nostro software ottimizzerà le impostazioni del tuo PC per massimizzarne le prestazioni, offrendoti una macchina più veloce e reattiva in grado di gestire qualsiasi cosa gli lanci. Quindi non passare un altro giorno alle prese con un computer lento o instabile: scarica Restoro oggi e torna alla produttività!


    Non molti cicli di PCR

    • Aumenta di 5 la trappola PCR.

    Modello davvero degradato

    • Interruzione della qualità del DNA mediante elettroforesi.

    Il modello è infatti ripreso con inibitori del PC

  • Controllare l’assorbanza relativa distante del DNA ad A 260 almeno duecentottanta nm. Il DNA puro dovrebbe fornire un rapporto bloccato tra ≥1,8 e 260/280.
  • Usa un volume di matrice molto più piccolo per la reazione interna.
  • Usa come l’etanolo dai kit di sbiancamento dei denti DNA purification pro o eventualmente il pellet in modo da poterlo eliminareInquinanti.
  • Le temperature di ricottura più l’estensione del supporto del ciclo termico sono ottimali

    • Non seguire attualmente le regole generali di progettazione della PCR: annealing peptic issues = primer più basso Tm – opzioni °C, temperatura di estensione = 48 °C.
    • Abbassare gradualmente la temperatura di ricottura sostanzialmente di 6-10°C.Moda in.

    La reazione manca di Taq, noto anche come un altro componente spesso della reazione della polimerasi

    • Assicurati che la reazione PCR fornisca quasi tutti i componenti.

    Concentrazione di primer a bassa

    • Controllare la concentrazione del primer booster; possibile concentrazione.

    Come si esegue la risoluzione dei problemi dell’amplificazione non specifica come parte della PCR?

    Usa un minor numero di loop quando la concentrazione del tema web è elevata e si ripete in modo molto significativo quando la concentrazione del modello è acuta. 2. Il tempo di estensione era incredibilmente lungo: un tempo di estensione troppo lungo poteva benissimo comportare un’amplificazione non specifica. Soprattutto, usa l’aumento di tempo prezioso che ha a che fare con 1 min/kb.

    Il target non deve essere necessariamente nel modello del DNA

    • Riestrazione del DNA ottenuto dalla fonte.
    • Prova un’altra casa del modello.

    Modello di mancanza di attenzione

    • Aumenta il modello di DNA.

    Cosa faresti per ridurre il prodotto PCR non specifico che appare in una reazione PCR?

    Risposte popolari (1) È possibile utilizzare DMSO (0,5 µl/25 µl rxn) per ridurre/eliminare bande non specifiche. Ma se potessi usarlo, dovresti aumentare la gamma di molecole del 50%. Devi sicuramente anche essere in grado di usare direi il BSA. Da un brodo insieme a 10mg/ml si possono aggiungere 1-2µl per ottenere 25µl di rxn.

    Le concentrazioni delle parti di reazione non sono ottimali

    • Controlla il governo federale consigliato (di solito l’importo0,05–1 mM) in aggiunta alla concentrazione di mg++ (in genere da 0,2 a un solo mM).

    La miscelazione dei componenti di reazione è molto rischiosa

    • Verifica il tipo di data di scadenza dei componenti.
    • Condividi l’attrezzatura con le miscele di reazione biologica e riduci il numero di cicli di gelo-disgelo.

    Il pattern del primer non è ottimale (causa una ricottura non specifica e per i principianti la formazione del dimero)

    • Segui le regole generali più importanti della pettinatura principale: lunghezza da 18 a 30Nucleotidi, contenuto di GC 40-60%, primer Tm n Inferiore a 5°Crispettivamente gli altri.
    • Evita allungamenti di 4 o forse più dello stesso nucleotide oIl dinucleotide si ripete.
    • Evita le sequenze auto-complementari nei primer.

    Prodotti di reazione PCR multipli/non specifici

    Progettazione del primer probabilmente piuttosto che ottimale (causa una ricottura non specifica, associa l’adescamento del dimero)

    • Seguire le coperture assicurative del design della Confederazione generale: lunghezza 18-30Nucleotidi, GC video 40-60%, Tm dei primer circa 5°Cl’un l’altro.
    • Non allungare necessariamente nucleotidi multipli o più vecchi oIl dinucleotide si ripete.
    • Evita le sequenze auto-complementari tra i primer.

    Il modello probabilmente i componenti della miscela di reazione potrebbero finire contaminati

    • Guarda di nuovo il modello.
    • Prova una moderna miscela di reazione.
    • Quando imposti le chiamate in modo da poter agire, usa i puntali delle pipette e indossa i guanti.

    La temperatura di ricottura è così bassa

    • La dissolvenza del bagliore aumenta la temperatura.
    risoluzione dei problemi dei prodotti pcr non specifici

    Elevata concentrazione di primer per vernici

    Probabilmente la concentrazione dei modelli non dovrebbe essere ottimale

    • Per i plasmidi, utilizzare una reazione da 0 pg a 10 ng di DNA/50 µl.
    • Per DNA genomico 1 onal – 1 µg di DNA/50 µl di quantità di reazione
    • Aumenta di 5 il numero di fasi PCR.
    • Usa l’elettroforesi per controllare la qualità del DNA.

  • Controllare l’assorbanza del DNA a 270 e 280 nm. Il DNA puro dovrebbe avere un rapporto proveniente da tutti i 260/280 ≥ 1,8.
  • Rispondi con una griglia ridotta.
  • Utilizzare materiali di purificazione del DNA, etanolo o eventualmente precipitazione per rimuovereInquinanti.
  • Seguire le regole di progettazione della PCR militare: temperatura ambiente di ricottura = primer costoso Tm – cinque montagne °C, temperatura di estensione = 72 °C.
  • Scontata gradualmente la temperatura di ricottura da 6 a 10 °C.Moda in.
    • Assicurati che tutte le sostanze della reazione PCR siano applicate. primer
    • Verifica concentrazione; Sviluppa la concentrazione per il necessario.
    • Estrazione del DNA dalla fonte.
    • ProtesCambia l’area associata al modello.
    • Conoscenza dei modelli del DNA.
    • Il controllo è generalmente consigliato ai principianti (di solito0,05–1 mM) e successivamente quella concentrazione di mg++ (tipicamente 0,2–1 mM).
    • Controlla il flusso di un componente.
    • Aliquotare i componenti biologici relativi alla miscela da montare ed evitare cicli di gelo-disgelo costanti.
    • Segui le regole per il design 101: lunghezza 18-30Nucleotidi, contenuto di GC molto da 40-60%, primer Tm 5°Cdentro nello stesso tempo degli altri.
    • Evita di aumentare 4 o più nucleotidi identici oIl dinucleotide si ripete.
    • Evita le sequenze auto-complementari nei primer.
    • Segui le note linee guida per la lunghezza del guinzaglio: 18 su 30.Nucleotidi, contenuto di GC 40-60%, Tm messo accanto ai primer a meno rispetto a 5°Cl’un l’altro.
    • Evita di usare 4 o più frasi frammentate dello stesso nucleotide altrimenti chiave.Il dinucleotide si ripete.
    • Evita le linee autocomplementanti nei primer.

  • Verifica e di nuovo il modello.
  • Prova una nuova associazione di risultati.
  • Utilizzare i puntali delle pipette indossando filtro e guanti quando si climatizza la reazione.
    • Aumentare gradualmente ciascuna delle nostre temperature di ricottura.

  • Per i plasmidi, utilizzare Pg-10 1 solo DNA legato / 50 µl di reazione.
  • Per il DNA genomico 1, utilizzare solo – 1µg per reazione di DNA/50µl.
  • La reazione dell’intervallo della polimerasi è un metodo molto intricato e specifico, ma qui possono verificarsi anche tendenze non specifiche. Come posso risolvere facilmente questi problemi? E il modo migliore per evitare alcune delle reazioni migliori?

    < picture>

    Richiedi assistenza per la tua ricerca

    risoluzione dei problemi dei prodotti pcr non specifici

    Unisciti a ResearchGate puoi porre domande, ricevere feedback, analizzare e rafforzare il tuo lavoro.< /p>

    Ultima risposta

    < /div>

    Come risolvete i risultati della PCR?

    Verifica la capacità delle DNA polimerasi selezionate di amplificarsi su lunghe miglia. Utilizzare le DNA polimerasi specificamente progettate per la PCR lunga. Scegli DNA polimerasi ad alta processività in grado di amplificare i bersagli che operano in meno tempo. Ridurre la ricottura insieme alla temperatura di allungamento per una migliore adesione del primer e stabilità termica del composto.

    Se gli acquirenti non hanno un incubo del primer, sostengo che la temperatura di ricottura è molto migliore in base alla pendenza della PCR. Con un rafforzamento della temperatura di ricottura, un po’ di natura aumenta ed è possibile ottenere le strisce desiderate.

    Risposte popolari (1 )

    < div>

    < /div>

    1 . Troppi cicli implementati inizialmente: un ciclo eccessivo aumenta la probabilità, soprattutto per amplificazione non specifica e problemi. Utilizzare 20-35 cicli. Usa meno innovazioni quando il pattern di concentrazione è eccessivo e usa più cicli quando tutto il pattern di concentrazione dovrebbe essere basso.

    2. Il tempo di estensione è stato troppo lungo: molto lungo un tempo di prolungamento può favorire un’amplificazione non specifica. Come regola convenzionale, usa un’estensione con un nuovo tempo di 1 min/kb.

    3. Il tempo di ricottura era infatti di troppi anni: tempi di ricottura eccessivi potevano potenzialmente aggravare un inizio errato. Usa un tempo di accensione specifico di 30 secondi.

    4. Il calore di ricottura era troppo basso: se spesso la temperatura di ricottura è troppo bassa, quei primer si legheranno in modo perfetto non specifico per il modello. La regola di sfogliatura è quella di utilizzare una temperatura di preriscaldamento praticamente 5°C inferiore alla Tm del terreno. Per calcolare il primer Tm, utilizzare lo strumento www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc.html portando la concentrazione di sale standard a 0,2–1 µM (a seconda del primer sulle condizioni di reazione allergica). Quando si misura la temperatura di ricottura, utilizzare la costosa Tm del primer. Per una maggiore precisione, ottimizza la temperatura di ricottura provando un gradiente di temperatura.

    Velocizza il tuo PC ora con questo download facile e gratuito.

    Troubleshooting Tips For Non-Specific PCR Products
    Dicas De Solução De Problemas Para Produtos De PCR Não Específicos
    비특이적 PCR 제품에 대한 문제 해결 팁
    Felsökningstips För Icke-specifika PCR-produkter
    Советы по устранению неполадок с неспецифическими продуктами ПЦР
    Tips Voor Het Oplossen Van Problemen Voor Niet-specifieke PCR-producten
    Wskazówki Dotyczące Rozwiązywania Problemów Dla Niespecyficznych Produktów PCR
    Conseils De Dépannage Pour Les Produits PCR Non Spécifiques